觀點丨FV1000-IX81激光掃描共聚焦顯微鏡常見問題

1.激光共聚焦DIC通道的光源是什么？

DIC通道的光源是激光，用的是透射光檢測裝置，只有透光的樣品才可看到。

2.熒光和白光是反射光還是透射光？

用汞燈和激光激發發射的熒光都是反射光，鹵素燈照明看到的光是透射光，不透明物體，鹵素燈看不到。

3.共聚焦熒光通道的顏色是實際顏色嗎？

不是，是偽彩色，光電倍增管只檢測強度信息，不檢測顏色信息。顏色可以隨意更改。不過可通過發射波長的范圍，判斷大概為什么顏色。

4.彩色CCD看到的是實際顏色嗎？

是實際顏色，用RGB進行了還原，但CCD顏色與目鏡中看到的稍有差異。

5.激光激發肯定比汞燈激發熒光強嗎？

不一定，首先激光是單色光，如488nm，而汞燈下，有一定寬度的波長范圍，如470-495nm， 激發波長不一樣，得到圖片的效果不一樣；其次，激光下采集熒光用共聚焦模式，樣品層切得比較薄，而汞燈下用CCD采集圖片，樣品層切得比較厚。因此看弱熒光，經常是激光不如汞燈下看得更好。

6.共聚焦拍照與普通熒光顯微鏡拍照有什么不同？

共聚焦用激光做光源，光電倍增管做檢測器，逐點掃描，對應每個像素其能量比較高；汞燈雖然總功率高，但屬于場照明，對應每個像素的能量并沒有激光高。共聚焦有針孔，可以排除焦平面
上焦點以外及非焦平面雜散光的影響，因此空間分辨率提高，但因為是每個像素每個像素逐點掃描，采集較慢，一張圖并不是同一時間采集的，時間分辨率不高；CCD拍照取的是樣品的同一時
間。

7.顯微鏡最重要的部件是什么？

是物鏡，物鏡數值孔徑（N.A.）越大，其分辨率越高。普通光鏡△R（分辨率）= 0.61λ/ N.A.；共聚焦△R = 0.51λ/ N.A.，λ為激發光波長。相同倍數的物鏡，其N.A.值越大，熒光透過的
越多，與N.A.平方成正比；N.A.值越大，焦深越小，也就是看到的樣品層越薄。

8.放大倍率怎么計算？

如果從目鏡觀察，觀察倍率(M) = 物鏡倍率 X 目鏡倍率顯示器觀察, 視頻系統（M）= (顯示器對角線/CCD對角線) X 接口倍率 X 物鏡倍率，共聚焦圖片的放大倍率，與像素分辨率、每個像素的大小、及圖像的實際大小相關。 M = 圖像的實際大小/ (像素分辨率X每個像素的大小)

9. 為什么油鏡比干鏡分辨率高？

倒置的熒光顯微鏡，對干鏡，激光透過物鏡進入蓋玻片，在物鏡和蓋玻片之間會有空氣，激光從物鏡進入空氣，也就是從光密介質進入光疏介質，光會偏離法線，造成損失；對于油鏡，浸油的折射率與玻璃一樣，因此激光從物鏡進入浸油沒有光損失，因此用油鏡分辨率要高。

本文轉載自小木蟲作者數數然者，原文鏈接：http://muchong.com/t-11668225-1。

材料牛石小梅編輯整理。